Главная святыня Гродненского Свято-Рождество-Богородичного монастыря — чудотворная икона Божией Матери «Владимирская Мироточивая». Судьба самой обители многострадальна: она горела, более чем три десятилетия в богоборческие времена была закрыта. Все это время монахини хранили икону.

В монастырь икона Владимирской Божией Матери попала в 1877 году. Ею жительница деревни Чещевляны вблизи Гродно Агриппина Домбровская благословила свою дочь Наталию на монашество. Мать дала в дорогу дочери икону, которую 20 лет благоговейно хранила. К ней же этот образ попал от родственницы, которая нашла его на чердаке. Вероятнее всего, икону там спрятал квартировавший у нее военнослужащий из Москвы, перед тем как уехать на войну, с которой так и не вернулся.

В монастырских архивах сохранилась не только история обретения образа, но и дата, когда икона Божией Матери «Владимирская» явила чудо. 7 октября 1877 года послушница Наталия, которая на тот момент жила в келье сестры Ольги Прототоповой, заметила на левой руке Богоматери маслянистое пятно и почувствовала, что из киота исходит необычное благоухание. Обрадованная чуду, она рассказала о нем монахине. Однако сестра Ольга отнеслась к словам молодой послушницы с недоверием, подумав, что та сама смазала образ розовым маслом. Вместе они сообщили об этом явлении игуменье Никодиме, которая на их глазах вытерла досуха место на иконе, а киот запечатала сургучной печатью. Радость наполнила весь монастырь, когда его насельницы увидели, что миро стало истекать с лика Богородицы и Младенца Иисуса еще обильнее. Почти год икона, оставаясь в монашеской келье, мироточила. Затем по распоряжению настоятельницы икону перенесли в монастырскую церковь. Миро было собрано в крестообразный ковчежец, который и ныне хранится в обители.

Весть о том, что в монастыре замироточил образ Богородицы, вмиг разлетелась по всей округе. К иконе стали стекаться многочисленные паломники. Летопись обители свидетельствует, что многие люди получили от нее исцеление от болезней и скорбей. К примеру, был засвидетельствован факт избавления от душевных и телесных терзаний бесноватой крестьянки Феклы Ласик из деревни Горны. Женщина пребывала в столь болезненном и бессознательном состоянии, что с трудом была введена в церковь монастыря, чтобы до начала божественной литургии приложиться к святому образу. Как только переступила порог храма, начала с неистовой силой вырываться, кричать и богохульничать. Приложившись к святому образу, несчастная вернулась в нормальное состояние. Неделю еще она провела в монастыре, неустанно молясь, а затем совершенно здоровой вернулась в свою семью.

Двадцатый век с его войнами и богоборчеством с невероятной силой обрушился на Гродненский Свято-Рождество-Богородичный монастырь.

В 1914 году началась поспешная эвакуация обители в Москву, туда насельницы увезли и чудотворную Владимирскую икону. Через семь лет, пережив революцию и гражданскую войну, сестры примут решение вернуться в гродненскую обитель, привезя с собой и главную ее святыню. В лихолетье Второй мировой обитель была действующей, а летом 1960 года монастырскую собственность экспроприировали. Игуменья и 43 насельницы переселились в уцелевший Жировичский монастырь. Под его покровом находилась и чудотворная икона «Владимирская Мироточивая». Лишь через тридцать два года гродненская обитель вернула свое предназначение.

Празднование иконе Божией Матери «Владимирская Мироточивая» совершается 20 октября.